本生快訊：人Ⅳ型膠原ELISA試劑盒實驗方案

　　人Ⅳ型膠原試劑盒操作注意事項:

　　1、試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

　　2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。

　　3、不同批號的試劑不要混用。

　　4、人Ⅳ型膠原試劑盒保質前使用。

　　5、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

　　6、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。

　　7、實驗完成后應立即讀取OD值。加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

　　人Ⅳ型膠原試劑盒樣品收集、處理及保存方法:

　　1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

　　2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　3、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘。

　　4、取上清液保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。

　　注意：盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　人Ⅳ型膠原試劑盒操作:

　　人Ⅳ型膠原試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

　　標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。

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